目前正在上高中的Junior Miles（Shameik Moore配音）不小心被一只被辐射污染的蜘蛛咬伤，他的身体发生了奇怪的变化。一次偶然的机会，他目睹了蜘蛛侠（Chris Pine配音）和犯罪头目金兵（Liev Schreiber配音）之间的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终做出了英勇的牺牲。不久之后，来自平行宇宙的颓废的彼得·帕克（由杰克·M·约翰逊配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金爵的阴谋，帮助帕克回到自己的宇宙，他们闯入了金爵的巢穴。在这个过程中，两人被章鱼博士和流浪者狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、影子蜘蛛侠、蜘蛛猪侠和动漫蜘蛛女相继出现。他们联合起来打击邪恶势力